污染是PCR实验室出现实验假阳性、结果不可信、研发不可靠的重要推手，PCR实验室应当将防污染作为日常管理、实验安排、清洁消毒、实验习惯的核心。PCR实验污染和细胞污染是有差别的，PCR实验污染主要是核酸而不是细菌和其他入侵者。

　　

　　按照PCR实验室的安全工作制度或安全标准操作程序，所有操作符合《实验室生物安全通用要求》（GB19489-2008）。

　　

　　1、严格执行各区功能划分：

　　

　　试剂储存和准备区：贮存试剂的制备、试剂的分装和扩增反应混合液的准备，以及离心管、吸头等消耗品的贮存和准备。

　　

　　标本制备区：核酸（RNA、DNA）提取、贮存及其加入至扩增反应管。对于涉及临床样本的操作，应符合生物安全二级实验室防护设备、个人防护和操作规范的要求。

　　

　　扩增区：cDNA合成、DNA扩增及检测。

　　

　　扩增产物分析区：扩增片段的进一步分析测定，如杂交、酶切电泳、变性高效液相分析、测序等。

　　

　　试剂准备区、样本制备区和扩增区内的实验用品，包括移液器等器具应专用，空气、物品流向依次为：试剂准备区、样本制备区、扩增区、产物分析区，不可逆行。

　　

　　2、清洁的实验用品：

　　

　　实验室自配试剂（去离子水、缓冲液等）和所有使用器具在使用之前均应高压灭菌或紫外杀菌。枪尖、反应管等实验耗材应一次性使用。

　　

　　3、正确的实验操作：

　　

　　实验应在超净工作台内进行，工作台内应放置PCR专用的微量离心机、各量程的移液器和其他必须物品。

　　

　　实验的过程中选择合适尺寸的手套并能及时更换，在进出不同实验区域或进行模板操作后都应更换实验服、口罩、帽子及手套，以避免不同实验区交叉污染。

　　

　　装有PCR试剂的反应管在打开之前应先瞬时离心，将管壁及管盖上的液体离至管底，降低污染手套或加样器的风险；谨慎开启反应管，防止管内液体溅出或形成气溶胶导致污染。

　　

　　吸加试剂和模板的操作应严格按照规范要求进行，遵守“慢吸快打”原则，尽量一次性完成，忌多次抽吸，以避免气溶胶产生的交叉污染。

　　

　　PCR试剂建议小量分装，以减少反复冻融、重复取样次数；多样本PCR反应时，先配制反应混合液分装至反应管中，然后加入样本核酸，请勿同时开盖，尽量保证单人单管，实现完全闭管操作。

　　

　　实验试剂应与样品和PCR产物分开保存，不应放于同处。

　　

　　PCR扩增实验完成后及时将反应管取出，用一次性手套将产物反应管包裹丢弃，保证管盖紧闭。

　　

　　4、规范的实验设计：

　　

　　应遵循PCR实验室内部质量控制的相关规定，实验中设立阳性对照、阴性对照和空白对照，全程质控实验过程，验证PCR反应的可靠性，并协助判断扩增系统的可信性。