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PCR实验室的防污染方法,您学会了吗?
发布时间:2022-11-22   点击次数:67次
  污染是PCR实验室出现实验假阳性、结果不可信、研发不可靠的重要推手,PCR实验室应当将防污染作为日常管理、实验安排、清洁消毒、实验习惯的核心。PCR实验污染和细胞污染是有差别的,PCR实验污染主要是核酸而不是细菌和其他入侵者。
  
  按照PCR实验室的安全工作制度或安全标准操作程序,所有操作符合《实验室生物安全通用要求》(GB19489-2008)。
  
  1、严格执行各区功能划分:
  
  试剂储存和准备区:贮存试剂的制备、试剂的分装和扩增反应混合液的准备,以及离心管、吸头等消耗品的贮存和准备。
  
  标本制备区:核酸(RNA、DNA)提取、贮存及其加入至扩增反应管。对于涉及临床样本的操作,应符合生物安全二级实验室防护设备、个人防护和操作规范的要求。
  
  扩增区:cDNA合成、DNA扩增及检测。
  
  扩增产物分析区:扩增片段的进一步分析测定,如杂交、酶切电泳、变性高效液相分析、测序等。
  
  试剂准备区、样本制备区和扩增区内的实验用品,包括移液器等器具应专用,空气、物品流向依次为:试剂准备区、样本制备区、扩增区、产物分析区,不可逆行。
  
  2、清洁的实验用品:
  
  实验室自配试剂(去离子水、缓冲液等)和所有使用器具在使用之前均应高压灭菌或紫外杀菌。枪尖、反应管等实验耗材应一次性使用。
  
  3、正确的实验操作:
  
  实验应在超净工作台内进行,工作台内应放置PCR专用的微量离心机、各量程的移液器和其他必须物品。
  
  实验的过程中选择合适尺寸的手套并能及时更换,在进出不同实验区域或进行模板操作后都应更换实验服、口罩、帽子及手套,以避免不同实验区交叉污染。
  
  装有PCR试剂的反应管在打开之前应先瞬时离心,将管壁及管盖上的液体离至管底,降低污染手套或加样器的风险;谨慎开启反应管,防止管内液体溅出或形成气溶胶导致污染。
  
  吸加试剂和模板的操作应严格按照规范要求进行,遵守“慢吸快打”原则,尽量一次性完成,忌多次抽吸,以避免气溶胶产生的交叉污染。
  
  PCR试剂建议小量分装,以减少反复冻融、重复取样次数;多样本PCR反应时,先配制反应混合液分装至反应管中,然后加入样本核酸,请勿同时开盖,尽量保证单人单管,实现完全闭管操作。
  
  实验试剂应与样品和PCR产物分开保存,不应放于同处。
  
  PCR扩增实验完成后及时将反应管取出,用一次性手套将产物反应管包裹丢弃,保证管盖紧闭。
  
  4、规范的实验设计:
  
  应遵循PCR实验室内部质量控制的相关规定,实验中设立阳性对照、阴性对照和空白对照,全程质控实验过程,验证PCR反应的可靠性,并协助判断扩增系统的可信性。
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